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技术文献 |
电泳仪、电泳槽的使用方法 |
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点击次数:1382 更新时间:2022-05-17 |
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电泳仪、电泳槽的使用方法 电泳仪:电泳技术是分子生物学研究*的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类。自由界面电泳不需要支持,例如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳和微电泳。这些类型的电泳目前很少使用。 .对于区域电泳,各种类型的物质被用作支持物。常用的载体有滤纸、醋酸纤维素薄膜、非凝胶载体、凝胶载体和硅胶-G薄层。分子生物学领域z常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动。不同的物质由于其不同的电荷和分子量而在电场中以不同的速度运动。根据这一特点,电泳的应用可用于不同物质的定性或定量分析。 ,或对某种混合物或提取物进行成分分析,制备单一成分,在临床检验或实验研究中具有重要意义。本电泳仪就是根据上述原理设计制造的。下面简单介绍一下它的使用方法和注意事项。 ● 使用方法 1、首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接起来,注意不要接反。 2. 将电泳仪电源开关调至关闭位置,将电压旋钮旋至最小。根据工作需要选择电压电流量程和电压电流量程。 3、打开电源,慢慢旋转电压调节旋钮,直到达到所需电压,设置电泳终止时间,此时开始电泳。 4、工作完成后,应将旋钮和开关旋至零位或关闭,并拔出电泳插头。 笔记 1、电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物体等可能带电的部位,也禁止在电泳槽内取放东西。如有必要,请先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好的接地端子,以防漏电。 2、仪器上电后,请勿临时加装或拔出输出线插头,以防短路。虽然仪器配备了保险丝,但短路仍可能对仪器造成损坏。 3.由于不同介质支架的电阻值不同,电游泳时通过的电流量也不同,游泳速度和游到终点所需的时间也不同,所以不同介质载体的电泳不宜同时在同一台电泳仪上进行. 4、总电流不超过仪表额定电流(最大电流范围)时,可多槽联用,但注意不要过载,否则容易影响仪表寿命。 5、在某些特殊情况下,需要检查仪器的电泳输入时,允许在稳定电流状态下空载开机,但在稳定电流状态下,必须接好负载后再开机,否则电压表的指针会大幅度跳动,容易造成不必要的人为损坏。 6、在使用过程中如发现噪音大、放电或有异味等异常现象,必须立即切断电源并进行维修,以免发生意外。 夹层式立式电泳槽使用方法: 1. 组件 (1) 一对装有铂丝的储液罐,装有冷却装置和电泳缓冲液出口。 (2)凹胶框配玻璃板,可分别制作1mm、1.5mm厚的凝胶板。操作时要选择厚度合适的玻璃板和梳子配合使用。 (3) 样品孔模具(梳子)用于电泳上样。 (4) 固定储液罐的螺杆和螺母有4对,28D和30型有5对。 (5) 五个橡胶管。两条长条用于连接冷却水的进出水口;两个中等长度用于连接电极缓冲;介质液体的流出端口;最短的一个用于连接储液罐之间的冷却水。 (6) 电线 1 对。 ● 2. 如何使用 (1) 清洗部件 上述部件在组装前应*清洁。特别是玻璃板和凹槽橡胶框必须用海绵蘸少许肥皂粉或清洁剂*清洁。清洗后的玻璃板在使用前应放在玻璃板架上晾干。 (2) 组装电泳槽 A、 1. 将四个固定螺钉分别插入储液架(半上罐)的相应孔中,然后将储液架放在桌面上。 2、左手握住凹槽橡胶模架,右手拇指和中指握住玻璃板的两侧边插入橡胶模架(注意手指不能碰到上面的玻璃)充满胶水的表面)盘子)。 3、将带玻璃的橡胶模架放在倒置的储液罐框架上,其下边缘必须与储液罐框架的下边缘对齐。 4、双手握住另一个储液罐框架,与放在桌面上的储液罐框架相匹配,在储液罐有机玻璃框架中心的橡胶框架上做凸出线。 5. 安装四个螺母并拧紧螺钉。注意拧紧螺丝时用力要均匀,最好用双手在斜角处逐渐拧紧。 6、将电泳槽垂直立起,放在桌面上。玻璃板短的储液槽称为上槽(阴ji端),玻璃板长的储液槽称为下槽(阳极duan)。玻璃板与胶框之间有间隙。这个间隙可以沿着长玻璃板的下端填充融化的 10% 琼脂。为防止气泡滞留,可轻轻抬起一端将气泡去除。在琼脂*凝固之前不要倒入凝胶。 B、也可以垂直竖立凹槽,将带玻璃的橡胶模架直接放入凹槽中,对称拧紧螺丝,底部边缘用琼脂密封。 (3)灌胶 1、先灌分离胶,待凝固后再倒浓缩胶。灌胶前先连接好冷却水,并夹住连接上下储液罐的两根胶管。 2. 用细尖滴管吸胶,从一端沿着长短玻璃板的间隙滴加胶水。为了防止气泡的产生,可以将另一端稍微挑起(气泡往上),不断加胶。如果用单层胶(分离胶),加胶量在距离短玻璃板上端0.3厘米左右,轻轻加少许水,双手轻轻插入梳子,凹出小样凝胶化后可形成注射孔。 3、为防止漏胶,应立即在上下储液槽中加入蒸馏水,但蒸馏水不得超过短玻璃板的上缘。 4、凝胶凝固后,可以看到样品槽的梳子和凝胶板之间有一层不同折射率的亮区。 (4) 添加样本 1、松开连接上下储液罐的两根橡胶管上的夹子,放出罐内的蒸馏水,待水用完后再夹住夹子。 2、双手轻轻取出加样梳,可以看到加样孔边界清晰,吸干孔内的水分(注意不要沿孔边缘损坏字面)。 3、上下储液罐加缓冲液;对于中间液体,液体高度应超过上储液罐短玻璃板的上沿。 4、用微测量注射器吸取一定量的样品,加到长短玻璃板之间的凹形凝胶样品孔中(注意加样动作要轻,针头不要损伤凝胶表面)。 (5) 电泳 第一储液器的引线连接到电泳仪的负极,下储液器的引线连接到电泳装置的正极。检查电路是否正确后,才能按要求的电压和电流进行电泳。 (6)取出塑料板 电泳完毕,拧下螺母,取出塑料框,撕下玻璃板,在两块玻璃板下角的缝隙中,用刀片背面轻轻撬动,然后将塑料面和一个分开玻璃板,将带胶板的玻璃板放在桌面上,双手沿凝胶底部轻轻提起薄膜,放入大培养皿中进行染色。胶板经过漂洗脱色后可以清晰看到胶条分开。 |
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