荧光分光光度计的原理和优缺点介绍 荧光分光光度计是一种用于扫描液相荧光标记发出的荧光光谱的仪器。它可以提供包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等多种物理参数,从各个角度反映分子的键合和结构。 荧光分光光度计的基本原理: 高压汞灯或氙灯发出的紫外线和蓝紫色光通过滤光片照射到样品池中,样品中的荧光物质被激发发出荧光,荧光经过滤和反射后,被光电倍增管接受,然后以图形或数字的形式显示出来。物质的荧光是由处于基态的物质分子吸收激发光而变成激发态而产生的。这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中,部分能量又以光的形式返回。发射,产生荧光。 由于不同物质的分子结构不同,激发态能级分布具有不同的特点,这体现在荧光上,因为各种物质都有自己*的荧光激发和发射光谱;因此,可以利用荧光激发和发射光谱之间的差异来定性识别物质。 荧光分光光度计的优缺点: 优点:灵敏度高,可用于扫描液相荧光标记物发出的荧光光谱,不仅可以做一般的定量分析,还可以推断分子在各种环境中的构象变化,从而阐明分子结构与功能。 缺点: 1、荧光的光强不高,线性情况有时不理想; 2. 某些反应荧光持续时间短; 3.荧光的发散方向不集中,不像透射光那么集中,强度高; 4、受某些离子的干扰影响,荧光会湮灭,测试速度一定要快。 |