DNA合成仪的合成原理: DNA的固相合成:即将DNA的3端固定在基材上,然后沿3到5方向依次加入核苷酸,直至合成所需的DNA片段。与使用 DNA 聚合酶合成 DNA 不同。 合成过程: 第一个碱基的3端固定在树脂上,下一个碱基的5-OH用二对甲氧基三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用苯甲酸保护,然后活化3-OH 与氨基磷酸酯化合物。 1.1 个碱基的 5-OH 和下一个碱基的 3-OH 形成亚磷酸三酯 2.然后与碘氧化形成磷酸三酯 3. 加入二lu乙酸去除第二个碱 5-OH 基团上的保护剂 DMT 合成完成后循环添加下一个碱基 1.用苯硫酚去除5-OH上的保护剂DMT 2. 用浓氢氧化铵将碎片与固体树脂断开并洗脱 3. 用浓氢氧化铵加热去除底座上的保护剂。 4. 除去氢氧化铵并真空干燥 5. 液相色谱或 PAGE,回收长片段。
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第17年
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