自动DNA合成仪仪器的故障排除

        化学合成方法与生化方法存在显着差异，材料和方法的微小变化往往会导致所得产品与可靠的合成路线之间存在差异。以下是一些可能导致失败的体验问题。
         1. 溶剂
        大多数用于化学合成的商业试剂不够纯。因此，使用前应进行纯化（常用方法：蒸馏）。对于“专为合成 DNA 纯度而设计"的溶剂，检查它们的颜色（几乎所有液体都是无色的）和透明度（颗粒会堵塞多孔玻璃，分子筛粉尘会导致合成失败）。大多数相关杂质是水、酸、碱和金属离子。
        水：将吸水的化学试剂蒸馏一次，大部分溶剂的含水量会降到10btg/g以下。由于偶联步骤中允许有少量水，因此可以使用具有这种水分含量的溶剂进行合成。很多溶剂都是吸湿的，所以所有的溶剂容器都应该密闭，只能短时间打开。通常不需要将它们储存在氩气中。
        酸和碱：氯化烃中常含有微量的盐酸，在合成过程中会造成二甲氧基三苯甲基的损失。检测方法如下： 将1mg 5,-O-二甲氧基三苯甲基脱氧核糖核苷酸衍生物溶于5ml溶剂中，在495nm处测定吸光度。应该没有吸收。极性溶剂中的一级和二级氨可以切断寡核苷酸与载体之间的键，这可以通过茚三酮试验来检测。
        金属离子：虽然在溶剂中没有这样的问题，但用作干燥剂的分子筛含有大量的铁。一些溶剂会从分子筛中过滤掉与 DNA 结合的三价铁离子，从而导致碱基修饰和核苷酸间切除。其他金属离子也可能有害。
         2. 试剂
        在 DNA 合成过程中，脱氧核糖核苷单体中的少量高活性杂质会产生非常大的影响。大量过量单体的应用扩大了杂质的影响。检测难度较大，但应引起高度重视。催化剂、偶联剂和脱保护剂中的杂质通常影响较小。
         3. 设备
        DNA 合成可以使用多种不同类型的仪器进行。总的原则是它可以应用于磷酰二酯法和亚磷酰胺三酯法。仪器一般分为4种类型：手动、半手动、半自动和自动（DNA合成仪）。 DNA合成仪减少了合成所需的手工劳动，但仪器无法替代人机故障。误差因仪器本身的检测能力而异。甚至仪器也没有“反馈控制"，可以准确地分析合成的成功或根据提供的信息进行调整。因此，该仪器并不是真正的“自动"（注意：测量释放的 DMT 组只是一种机械检查，不是可用产品量的可靠指南，而是链扩增效率的指南）。总之，无论选择哪种仪器，与溶剂接触的部分都应使用玻璃或聚四氟乙烯。