电泳仪、电泳槽的使用方法和注意事项 电泳:电泳技术是分子生物学研究*的重要分析方法。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类。自由界面电泳不需要支持,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳、微电泳等。这种类型的电泳目前很少使用。 .在区带电泳中,需要各种类型的材料作为支持物。常用的支持物有滤纸、醋酸纤维素膜、非凝胶支持物、凝胶支持物和硅胶-G薄层等,分子生物学领域常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳是指带电粒子在电场中的运动。由于电荷和分子量不同,不同的物质在电场中以不同的速度移动。根据这一特点,可以利用电泳对不同物质进行定性或定量分析。 ,或某种混合物用于成分分析或单成分提取制备,在临床试验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪就是根据上述原理设计制造的。下面简单介绍一下它的用法和注意事项。 ● 使用方法 1、先用电线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接起来,注意不要接反。 2、将电泳仪电源开关拨至关闭位置,电压旋钮拨至小,根据工作需要选择电压电流的电压电流范围。 3. 打开电源,缓慢转动电压调节旋钮,直到达到所需电压,设置电泳终止时间,然后开始电泳。 4、工作完成后,转动旋钮开关至零位或关闭状态,拔出电泳插头。 笔记 1、电泳仪通电进入工作状态后,严禁人体接触电极、电泳物体等可能带电的部位,也不得在电泳槽内取放东西。如有必要,请先关闭电源,以免触电。同时仪表必须有良好的接地端子,防止漏电。 2、仪器通电后,请勿临时加拔输出引线插头,以防短路。虽然仪器装有保险丝,但短路仍可能对仪器造成损坏。 3.由于不同介质支撑的电阻值不同,电泳时通过的电流量也不同,游泳速度和到达终点所需的时间也不同。因此,不同介质载体的电泳不应在同一台电泳仪上同时进行。 4、当总电流不超过仪器额定电流(大电流量程)时,可以多槽联合使用,但注意不要带载,否则容易受到影响仪器寿命。 5、在某些特殊情况下,当需要检查仪器的电泳输入时,允许在稳态下空载开机,但在稳态下开机前必须先接负载,否则电压表指针会跳的很大,容易造成不必要的人机损坏。 6、在使用过程中如发现异常现象,如巨响、放电、异味等,必须立即切断电源进行维修,以免发生事故。 夹层式立式电泳槽使用方法: 一。成分 (1) 一对装有铂丝的储罐,装有冷却装置和电泳缓冲液出口。 (二)凹胶框,配玻璃板,可制作厚度分别为1mm和1.5mm的凝胶板。操作时,选择合适厚度的玻璃板和梳子配套使用。 (3) 样品孔模具(梳子)用于电泳加载。 (4) 固定储液罐的螺钉和螺母有4对,28D和30型有5对。 (5) 五个橡胶管。两条长的用于连接冷却水的进出水口;两个中长的用于连接电极缓冲液;介质液体出口;短的用于连接储罐之间的冷却水。 (六)电线1对。 ● 2. 使用方法 (一)清洗零件 上述零件在组装前必须*清洁。尤其是玻璃板和凹槽胶框,必须用泡沫海绵蘸少许肥皂粉或清洁剂*清洁。清洗干净的玻璃板应放在玻璃板架上,用水晾干后方可使用。 (二)组装电泳槽 A. 1、将四颗固定螺丝插入储液架(半上罐)对应的孔中,然后将储液架放在工作台上。 2、左手握住凹槽胶模框,右手拇指和中指握住玻璃板的两边缘,插入胶模框(注意手指不能碰到玻璃板在胶面上)。 3、将带玻璃的橡胶模框放在储液罐框架的上侧,其下缘必须与储液罐框架的下缘对齐。 4. 用双手拿起另一个储液罐架,将其与桌面背面的储液罐架对齐,并在位于储液架有机玻璃架中央的橡胶架上做凸线坦克。 5. 安装四个螺母并拧紧螺钉。注意拧紧螺丝时用力要均匀,用双手以斜角逐渐拧紧螺丝。 6. 将电泳槽垂直竖立,放在桌面上。玻璃板较短的储罐称为上罐(阴),玻璃板较长的储罐称为下罐(阳)。它在长玻璃板上。胶框之间有间隙。这个缝隙可以融化10%琼脂沿长玻璃板的下端倒入。为防止气泡滞留,可通过轻轻抬起一端去除气泡。琼脂*凝固后即可倒入凝胶。 B、也可以垂直竖起凹槽,将装有玻璃的橡胶模框直接放入凹槽中,对称拧紧螺丝,用琼脂封底。 (3)浇注胶 1、先浇分离胶,凝固后再浇浓缩胶。灌胶前先连接冷却水,夹住连接上下液槽的两根胶管。 2、用细尖滴管吸胶,从一端沿长短玻璃板的缝隙加入胶水。为防止起泡,可将另一端捡起(气泡往高处),继续加胶。对于单层胶(分离胶),加胶量距离短玻璃板顶部0.3厘米左右。轻轻加入少许水,用双手轻轻插入梳子。胶凝后,可以形成一个凹进的样品孔。 3、为防止漏胶,应立即在上下储液罐中加入蒸馏水,但蒸馏水不能太短于玻璃板边缘。 4.凝胶凝固后,可以看到样品槽梳子和凝胶板之间有一层亮区 具有不同的发射率。 (四)取样 1. 松开连接上下水箱的两根橡胶管上的夹子,放掉水箱中的蒸馏水,待水流出后再夹上夹子。 2、用双手轻轻取出样品梳,可以看到清晰的样品孔,并吸去孔内的水分(注意不要损坏孔的字面)。 3、上下储液罐加慢;中间液体,液体高度应*超过上液罐的短玻璃板边缘。 4、用微量注射器吸取一定量的样品加入长短玻璃板之间的凹凝胶样品孔中(注意加入样品的动作要轻,针头不能损坏橡胶表面)。 (五)电泳 一根储罐线接电泳仪负极,下储罐线接电泳仪正极。检查接线是否正确,即可按要求的电压和电流进行电泳。 (六)拆胶板 电泳结束后,松开螺母,取出胶框,撕下玻璃板,在两块玻璃板下角之间的缝隙中,轻轻撬开刀片背面,将胶面连接成一个单独的玻璃板,将带有橡胶板的玻璃板放在桌面上,用双手沿着凝胶底部轻轻握住薄膜,然后将其放入大培养皿中进行染色。漂洗脱色后可以清晰地看到橡胶板。将条分开。 注意力。它可以用作带有两种凝胶的电泳槽。制作凝胶时,应将三根线全部插入电泳槽中,以免不小心碰到台面。 |