1、分光光度的分类与基本工作原理

光电比色计采用滤光片获得单色光,因为滤光片性能较差,只能得到近似的单色光,因而影响了光电比色计的灵敏度与准确度。而采用分光光度法,又同时提高仪器的灵敏度。有的仪器又同时用特制的光电管代替光电池,则又扩大了使用的光谱区范围。

分光光度法是通过分光系统(又称色散系统)将复合光渡分成一系列波长的单色光,其中某一波长的单色光,可根据被测物质对某一渡长光渡的吸收强弱来选取。

分光光度计的分光系统又称单色器,通常是采用援镜将复合光分成单色光;其它部分的的造与光电比色计基本相同。

(1)分类

(2)基本工作原理

分光光度法的定量关系也可用朗伯一比尔定律表示。分光光度法比光电比色法的灵敏度高,其灵敏度的表示方法有两种二摩尔吸光系数e和禁德尔(SandeJ1)灵敏度S(又称为灵敏度指数9)。

根据朗伯一比尔定律(式7-4)可知,大多数显色反应的摩尔吸光系数为10~105,该值越大,表示该显色反应灵敏度越高。

2、分光光度计的构造与使用

以721型分光光度计0为例介绍其构造与使用。

721型分光光度计適用手在可见光谱区的范围360~800nm内进行定量比色分析用。仪器在410~710nm之间可增加消光片或采用有色溶液作被测溶液的陪衬代替空自,以便提高分析灵敏度和提高消光读数范围。

(1)仪器的结构

仪器由光源灯部件、单色光器部件、入射光与出射光调节部件、比色皿座部件、光电管暗盒(电子放大器)部件、稳压电源部件等几部分组成。其结构原理图见图7-11,内部结构示意图见图7-12。

(2)光学系统

721型分光光度计采用自准式光路、单光束方法,其波长范围360~800nm,用钨丝白類、灯泡作光源,光学系统示意图见图7-13。

由光源灯发出的连续辐射光线,射到聚光透镜上,会聚后再经过平面镜转角90°,反射至入射狭鐘。光线到达单色光器内,狭鐘正好位子球面准直镜的焦面上,当入射光线经过准直镜反射后就以一束平行光射向接镜(该接镜的青面镀將),光线进入接镜后,就在其中色散,入射角在zui小偏向角,入射光在铝面上反射后是依原路稍偏转一个角度反射回来,这样从接_镜色散后出来的光线再经过物镜反射后,就会聚在出光狭鐘上,出射狭鐘和入射狭缝是一体的,为了减少谱线通过接镜后呈现弯曲形状对于单色性的影响,因此把狭整的两片刀口做成孤形的,使其近似地吻合谱线的弯曲度,保证了仪器有一定幅度的单色性。